Image

Metoden for å oppnå genetisk konstruert humant insulin

Oppfinnelsen vedrører området for bioteknologi, nemlig å oppnå genetisk konstruert humant insulin for fremstilling av legemidler som brukes til behandling av diabetes. Fremgangsmåten for å oppnå genetisk konstruert humant insulin utføres ved å dyrke produsentstammen Escherichia coli JM 109 / pPINS07, isolere inklusjonslegemer som inneholder hybridproteinet, deretter vaske inklusjonslegemene, oppløse og gjenopprette disulfidbindinger utføres samtidig i en buffer som i tillegg inneholder 5-10 mM ditiotreitol i 3-7 timer. Rensing av det regenererte fusjonsproteinet utføres i ett trinn ved ionebyttekromatografi. Spaltning av hybridproteinet utføres ved felles hydrolyse med trypsin og karboksypteptase B med et massevolum av hybridproteinet, trypsin og karboksypteptase B 4000: 1-2: 1. Insulin renses ved hydrofob kromatografi etterfulgt av gelfiltrering og isolering av insulin ved krystallisering i nærvær av sinksalter. Oppfinnelsen tillater å redusere prosessen med å oppnå genetisk konstruert humant insulin og øke dens utgang.

Oppfinnelsen vedrører området for bioteknologi, nemlig å oppnå genetisk konstruert humant insulin for fremstilling av legemidler som brukes til behandling av diabetes.

Med tanke på de viktigste prestasjonene i moderne diabetologi og anbefalingene fra Verdens helseorganisasjon, gjennomførte europeiske land i 2001 overgangen til bruk av humant insulin. I denne forbindelse er utviklingen av metoder for å skaffe insulin ved hjelp av metodene for DNA-rekombinant teknologi en viktig oppgave.

En metode for å oppnå genetisk konstruert humant insulin, som består i dyrking av produsentstamme E. Coli, som produserer proinsulin, inneholdende to syntetiske IgG-bindingsdomener av stafylokokprotein A. Isolasjonsskjemaet består i ødeleggelse av bakterielle celler, produksjon av inklusjonslegemer som inneholder proinsulin, oppløsning av inklusjonslegemer, oksidativ sulfitolyse av proinsulin, dets renaturering, rensing av omdannet protein ved affinitetskromatografi, spaltning av proinsulin ved proteolytiske enzymer (tur blå og karboksypeptidase B) og sluttrensing av insulin ved høy ytelse reversfase væskekromatografi. (Nilson J., Jonasson P., Samuelsson E., Stahl S., Uhlen M. "Integrert produksjon av humant insulin og dets C-peptid", Journal of biotechnology, 1996, v.48, s. 241-250).

Ulempene ved denne metoden er den høye prisen på produktet og bruken i produksjonen av insulin-vaskemiddel, som kan være tilstede i målproduktet.

En metode for å oppnå genetisk konstruert humant insulin, som består i å dyrke celler av produsentstammen E. coli DN5 a / pVK.100, ødelegger bakterielle celler ved desintegrasjon, separerer inklusjonslegemer som inneholder hybridproteinet fra vannløselige urenheter ved sentrifugering, oppløses inklusjonslegemer i en buffer inneholdende 8 M urea, 1 mM ditiotreitol, 0,1 M Tris-HCI, pH 8,0, i 12-16 timer. De uoppløste urenheter fjernes ved sentrifugering, hvoretter konsentrasjonen av ditiotreitol økes til 10 mM og reduseres t disulfidbindinger ved 4 oC i 1 time. Oppløsningen fortynnes 5 ganger med kaldt vann, pH justeres til 4,5 og holdes ved 4 oC i 2 timer for å danne et bunnfall. Bunnfallet som inneholder hybridproteinet separeres ved sentrifugering og renatureres, oppløses raskt i kaldt vann ved pH 10-12, fortynnes deretter med 10 mM glycinbuffer pH 10,8 og holdes ved oC over natten. Etter ultrafiltrering ble oppløsningen gelfiltrert på en Sephadex G-50 kolonne og eluert med 10 mM glycinbuffer. Samle fraksjoner som inneholder hybridproteinet, utfør ultrafiltrering og frysetørket. Det resulterende hybridproteinet oppløses i 0,08 M ​​Tris HC1 buffer, pH 7,5 til en konsentrasjon på 10 mg / ml og deles samtidig med trypsin og karboksypteptase B (karboksypeptidase B-forhold: trypsin: hybridprotein 0,3: 1: 10) ved 37 o C i 30 min. Deretter tilsettes isopropanol til 40%. Blandingen blir underkastet kromatografisk rensing på en kolonne med DEAE-Sephadex A-25 og eluert med 0,05 M Tris HC1 buffer, pH 7,5 med 40% isopropanol med en lineær gradient av natriumklorid fra 0 til 0,1 m. Etter fjerning av isopropanol økes konsentrasjonen av natriumklorid opptil 25%, blir pH skiftet til 2,0 og utfelling av insulin oppsamlet (Chen J.-Q., Zhang N.-T., Hu M. -N., Tang J.-G., "Production of human insulin in an E. Coli-system med met-lys-humant proinsulin som uttrykt som forløper "Anvendt biokjemi og bioteknologi, 1995, v. 55, s. 5-15).

Ulempene med denne metoden inkluderer bruk av gelfiltrasjon i de innledende stadier, som krever en signifikant mengde sorbent og et stort antall enzymer anvendt i spaltningen av hybridproteinet.

Kjent er det nærmeste til den patentsøkte fremgangsmåte for fremstilling av genetisk-modifiserte humant insulin omfatter dyrking av produsenten stammen Escherichia coli JM109 / pPINS07, ødeleggelse av den bakterielle nedbrytning av cellene, separering av inklusjonslegemer inneholdende fusjonsproteinet, deres oppløsning i en buffer inneholdende urea og ditiotreitol, renaturering og rensing renaturert fusjonsprotein ved utfelling av urenhetsforbindelser i 40% isopropanol, etterfulgt av kromatografi på KM-sepharose, dens sekvensielle splitting med trypsin og karboksy peptidase B, mens produktene av trypsinolyse kromatograferes på SP-Sepharose, ekvilibrert med 0,03-0,1 M ammoniumacetatbuffer pH 5,0-6,0, inneholdende 6 M urea, med eluering av fraksjonene med en lineær gradient av natriumklorid fra 0 til 0,5 M i startbufferen, og insulinseksjonen oppnådd etter spaltning med karboksypteptase B renses ved fremgangsmåten med høyfrekvent væskekromatografi i reversfase (RP HPLC) etterfulgt av gelfiltrering. Ulempene ved fremgangsmåten innbefatter bruk av signifikante mengder urea i kromatografistrinnet på SP-sepharose (problemet med etterfølgende utnyttelse) og bruken av organiske løsningsmidler i separasjonsstadiet av det rekombinante protein og stadium av insulinrensing ved høyytelsesvæskekromatografi (problem med miljøvern i industriell produksjon).

Oppfinnelsen løser problemet med å forenkle prosessen.

Oppgaven løses på grunn av det faktum at i metoden for å oppnå genetisk konstruksjon av humant insulin, inkludert dyrking av produsentstammen Escherichia coli JM 109 / pPINS07, celleforstyrrelse ved desintegrasjon, separering av inklusjonslegemer som inneholder hybridproteinet, deres oppløsning i en buffer som inneholder urea og ditiotreolol, restaurering av disulfidbindinger, renaturering og rensing av det omdannede fusjonsproteinet, dets spaltning med trypsin og karboksypteptase B, etterfulgt av rensing og frigjøring av insulin, tidligere brukt vask i Taurus utføres proteinoppløsning og reduksjon av disulfidbindinger samtidig i en buffer med 5-10 mM ditiotreitol og 1 mM EDTA i 3-7 timer, rensing av det regenererte fusjonsproteinet utføres i ett trinn ved ionebyttekromatografi; splitting av hybridproteinet utføres ved felles hydrolyse med trypsin og karboksypeptidase B ved et masseforhold av hybridprotein, trypsin og karboksypteptase B 4000: 1-2: 1, blir rensing av insulin utført ved hydrofob kromatografi etterfulgt av gelfiltrering, og frigivelsen av insulin er crista lysis i nærvær av sinksalter.

Metoden er som følger.

For å oppnå genetisk konstruert humant insulin brukes en stamme av bakterien Escherichia coli 1M109 / pP1H807, som produserer et hybridpolypeptid som inneholder humant proinsulin. Produsentbiosyntese utføres som følger.

Ved dyrking av cellene i produsentstammen Escherichia coli JM 109 / pPINS07 for å oppnå et inokulum, blir næringsmedium basert på kaseinhydrolysat og baktjærekstrakt podet med kulturen av produsentstammen, så dyrkes frømaterialet i en 10 liter fermentor. Det oppnådde frømaterialet blir brukt til såing av en fermentor med et volum på 100 l. Fermentering utføres til kulturen når en optisk tetthet på 30 OE ved induksjon av syntesen av et fusjonsprotein med isopropyltio-P-D-galaktopyranosid. Etter gjerdingens slutt separeres cellene fra produsenten av hybridproteinet (biomasse) ved sentrifugering, ødelagt på en Gaulin-desintegrator, og inklusjonskroppen isoleres ved sentrifugering.

Inklusjonslegemer oppnådd etter disassegrasjon av biomasse behandles i henhold til følgende skjema: 1. Inklusjonslegemer vaskes to ganger med vann og 50 mM Tris-HCl ved pH 9,0.

2. De vasket inklusjonskroppene oppløses i en buffer inneholdende 50 mM Tris-HCl, 8,0 M urea, 1 mM EDTA, 0,2 M NaCl, 5-10 mM ditiotreitol, ved pH 8,0. Bunnfallet separeres ved sentrifugering.

3. Supernatanten som inneholder det rekonstituerte fusjonsproteinet fortynnes med 25 mM Tris-HCI-buffer med en pH på 8,5-9,5 eller 25 mM Na-glycinbuffer ved pH 9,5-10,5 ved 4-9 oS så slik at konsentrasjonen av totalt protein er 0,4-0,8 mg / ml. Oppløsningen opprettholdes under avkjøling og omrøring i 72 timer.

4. Rensing av hybridproteinet utføres ved kromatografi på DEAE-sepharose FF, DEAE-toyuloperl, etc. eller på SP-sepharose FF, SP-toyooper, etc.

5. Til den resulterende oppløsning av det rensede fusjonsprotein blir en oppløsning inneholdende karboksypteptase B og trypsin tilsatt. Ved slutten av reaksjonen (HPLC-data) stoppes hydrolysen ved å surgjøre oppløsningen til pH 3,0, natriumklorid tilsettes, omrøres i 30 minutter og sentrifugeres. Bunnfallet overføres til neste trinn av rensing.

6. Proteinutfellingen som inneholder insulin, oppløses i 10 mM sitronsyre, natriumklorid tilsettes til en konsentrasjon på 1 M og oppløsningens pH justeres til 6,1-6,5. Oppløsningen blir sentrifugert og supernatanten som inneholder insulin påføres en kolonne inneholdende en hydrofob sorbent, ekvilibrert med den opprinnelige bufferoppløsningen. Det sorberte materialet elueres med en lineær gradient av etylalkohol. Fraksjoner som inneholder insulin med en renhet på minst 98% kombineres og overføres for ytterligere rensing.

7. Oppløsningen inneholdende insulin blandes med en lik mengde av en oppløsning av 4 M natriumklorid i 10 mM sitronsyre, holdes under omrøring i kulde og sentrifugert. Bunnfallet oppløses i 0,5 M eddiksyre, filtreres og overføres til gelfiltrering. Gelfiltreringen av insulinoppløsningen utføres på en kolonne inneholdende Sephadex G-50 SF SG.

8. Til oppløsningen av insulin som er oppnådd i det foregående trinn, tilsett zinkacetat, bring pH til 5,8-6,2 med konsentrert ammoniakkoppløsning. Suspensjonen omrøres i 2 timer, deretter sentrifugeres. Bunnfallet ble vasket med pyrogenfritt vann, oppløst i 60 mM sitronsyre, hvilket ga en insulinkonsentrasjon på 4 mg / ml. Den resulterende løsningen underkastes steriliserende filtrering, tilsatt etylalkohol til en konsentrasjon på 15% og en løsning av sinkklorid, pH-verdien er justert til 6,0-6,3 med konsentrert ammoniakk, omrørt ved 4-6o C i 4 timer og sentrifugert. Krystallene vaskes i rekkefølge med pyrogenfritt vann, etylalkohol og absolutt etylalkohol og tørkes i en vakuumovn.

Oppfinnelsen er illustrert ved hjelp av eksempler.

Dyrkning av celler av produsentstammen Escherichia coli JM109 / pPINS07 utføres som følger: For å oppnå et inokulum blir et næringsmedium basert på kaseinhydrolysat og baktjærekstrakt podet med en kultur av produsentstammen, så dyrkes frø i en 10 liter fermentor. Det oppnådde frømaterialet blir brukt til såing av en fermentor med et volum på 100 l. Fermentering utføres til kulturen når en optisk tetthet på 30 OE ved induksjon av syntesen av et fusjonsprotein med isopropyltio-P-D-galaktopyranosid.

Etter gjerdingens slutt separeres cellene fra produsenten av hybridproteinet (biomasse) ved sentrifugering, ødelagt på en Gaulin-desintegrator, og inklusjonskroppen isoleres ved sentrifugering.

250 g inklusjonslegemer vaskes med vann og 50 mM Tris-HCl ved pH 9,0. For å gjøre dette blir inneslutningslegemer suspendert i vann ved et masseforhold Taurus og vann på 1: 4 under omrøring i 30 minutter. Deretter sentrifugeres suspensjonen ved 25 000 g i 30 minutter, supernatanten blir kastet, og utfellingen blir vasket med 50 mM Tris-HCl.

De resulterende inklusjonslegemer oppløses ved konstant omrøring på en magnetomrører i en bufferløsning inneholdende 50 mM Tris-HCl, 8,0 M urea, 1 mM EDTA, 0,2 M NaCl, 10 mM ditiotreitol, ved pH 8,0. Reaksjonen utføres i 3 timer ved en temperatur på 20 ° C. Det uoppløste materialet separeres ved sentrifugering ved 25 000 g i 30 minutter.

Det totale proteininnholdet, bestemt ved metoden for Lowry, er 28 g, innholdet av hybridproteinet ifølge SDS-elektroforese er 50%.

Supernatanten som inneholder det rekonstituerte fusjonsproteinet fortynnes med 25 mM Tris-HCI buffer, pH 9,0, avkjøles til 4 ° C slik at konsentrasjonen av totalt protein er 0,4 mg / ml. Oppløsningen opprettholdes under avkjøling og omrøring i 72 timer.

Rensing av hybridproteinet utføres ved kromatografi på DEAE-sepharose FF. En kolonne med en diameter på 113 mm, inneholdende 1,5 1 DEAE-sepharoseFF og ekvilibrert med 25 mM Tris-HCl-buffer ved pH 7,5, påføres en oppløsning av det renerte fusjonsproteinet. Sorbetprotein elueres fra kolonnen med en saltgradient fra 0 til 0,3 M natriumklorid i den opprinnelige buffer. Fraksjonene som inneholder hybridproteinet kombineres og brukes til å produsere insulin. Utgangen av det renaturerte hybridproteinet med en renhet på 93-98% er 9 g.

Innholdet av hybridproteinet bestemmes av den optiske densitet av løsningen ved 280 nm.

Til 900 ml av den resulterende løsningen med en pH på 7,5, som inneholder 9 g hybridprotein, tilsettes en nyopparbeidet oppløsning av 4,5 mg trypsin i saltsyre, en oppløsning inneholdende 2,25 mg karboksyptidase B (i et masseforhold på 4000: 2: 1) og blande på en magnetomrører ved 37 ° C i 1 time. Ved slutten av reaksjonen stoppes hydrolysen ved surgjøring av oppløsningen med saltsyre til pH 3,0. Graden av hydrolyse av hybridproteinet er ikke mindre enn 95%. Innholdet av insulin i reaksjonsmediet i henhold til RP HPLC er 2,3,

Natriumklorid tilsettes til den surgjorte oppløsning av hybridproteinhydrolysatet til en konsentrasjon på 2M, omrøres i 30 minutter og sentrifugeres ved 25.000 g. Supernatanten kasseres, og utfellingen overføres til det neste rensingstrinn.

Proteinutfellingen, som inneholder 2,3 g insulin, oppløses i 10 mM sitronsyre, natriumklorid tilsettes til en konsentrasjon på 1 M og oppløsningens pH justeres til 6,1. Den opaliserende oppløsningen sentrifugeres og supernatanten påføres på en 5/60 cm kolonne inneholdende 0,8 liter Butyl-Toyopearl 650, tidligere ekvilibrert med 10 mM nitratbuffer med 1 M natriumklorid, pH 6,1. Sorbenten vaskes med den opprinnelige bufferoppløsning, deretter med den samme buffer under betingelser med en lineært redusert konsentrasjon av natriumklorid fra 1 til 0 M og 10 mM citratbuffer med en pH på 6,1. Insulin ble eluert med en lineær gradient av etylalkohol fra 0 til 25% i 10 mM citratbuffer. De oppsamlede fraksjoner av proteinoppløsningen analyseres ved RP-HPLC. Fraksjonene som inneholder insulin med en renhet på minst 98% (1,05 g) kombineres og overføres for ytterligere rensing. Proteinfraksjoner inneholdende insulin med høyere innhold av urenheter kombineres og sendes for ytterligere rensing.

En oppløsning inneholdende 1,05 g insulin blandes med en lik mengde av en oppløsning av 4 M natriumklorid i 10 mM sitronsyre, holdes under omrøring i kjøleskap i 2 timer og sentrifugert i 20 minutter ved 20 000 g. Bunnfallet oppløses i 0,5 M eddiksyre, filtreres og overføres til gelfiltrering. Gelfiltrering av insulinoppløsningen utføres på en 5/100 cm kolonne som inneholder 1,7 liter Sephadex G-50 SF SG, tidligere ekvilibrert med en 0,5 M oppløsning av eddiksyre. De oppnådde fraksjoner analyseres ved hjelp av HPLC-ekskluderingsmetoden, og fraksjonene som inneholder insulin uten høye og lavmolekylære urenheter, blir kombinert. Utgangen av insulin på dette stadiet er 0,9 g

Til 200 ml av en oppløsning av insulin i 0,5 M eddiksyre inneholdende 0,9 g insulin, tilsett zinkacetat til en konsentrasjon på 0,05 M, bring pH til 6,0 med konsentrert ammoniakkløsning. Suspensjonen omrøres på en magnetomrører ved 4 ° C i 2 timer, deretter sentrifugeres ved 20.000 g i 15 minutter. Supernatanten kastes, og utfellingen blir vasket med pyrogenfritt vann og sentrifugert igjen. Insulinsubstituatet oppløses i 60 mM sitronsyre med en konsentrasjon på 4 mg / ml. Den resulterende løsningen underkastes steril filtrering, tilsatt etylalkohol til en total konsentrasjon på 15% og 3,5 ml av en 5% vandig løsning av sinkklorid, hvoretter pH-verdien ble justert til 6,2. Litt opaliserende oppløsning lar seg langsomt røre ved 4 ° C i 4 timer, deretter sentrifugeres ved 5000 g i 15 minutter. Supernatanten helles, precipitatet vaskes suksessivt med pyrogenfritt vann (to ganger), etylalkohol og absolutt etylalkohol (to ganger). Krystallene tørkes i en vakuumovn.

Utbyttet av krystallinsk insulin er 0,8 g.

Kultivering av celler fra produsentstammen Escherichia coli JM109 / pPINS07 utføres som følger.

For å oppnå inokulumet blir næringsmediet basert på kaseinhydrolysat og bakers gjærekstrakt inokulert med produsentstammen, så vokser frøet i en 10 1 fermentor. Det oppnådde frømaterialet blir brukt til såing av en fermentor med et volum på 100 l. Fermentering utføres til kulturen når en optisk tetthet på 30 OE ved induksjon av syntesen av et fusjonsprotein med isopropyltio-P-D-galaktopyranosid.

Etter gjerdingens slutt separeres cellene fra produsenten av hybridproteinet (biomasse) ved sentrifugering, ødelagt på en Gaulin-desintegrator, og inklusjonskroppen isoleres ved sentrifugering.

250 g inklusjonslegemer vaskes med vann og 50 mM Tris-HCl ved pH 9,0. For å gjøre dette, blir inklusjonslegemer suspendert i vann ved et masseforhold mellom Taurus og vann på 1:20 med omrøring i 30 minutter. Suspensjonen sentrifugeres deretter ved 25 000 g i 30 minutter, supernatanten kastes, og utfellingen blir vasket med 50 mM Tris-HCl.

De resulterende inklusjonslegemer oppløses ved konstant omrøring på en magnetomrører i en bufferløsning inneholdende 50 mM Tris-HCl, 8,0 M urea, 1 mM EDTA, 0,2 M NaCl, 5 mM ditiotreitol, ved pH 8,0. Reaksjonen utføres i 7 timer ved en temperatur på 20 ° C. Det uoppløste materialet separeres ved sentrifugering ved 25 000 g i 30 minutter.

Det totale proteininnholdet, bestemt ved metoden for Lowry, er 25 g, innholdet av hybridproteinet ifølge SDS-elektroforese er 50%.

Supernatanten som inneholder det rekonstituerte fusjonsproteinet fortynnes med 25 mM Na-glycinbuffer, pH 10,0, avkjøles til 9 ° C slik at konsentrasjonen av totalt protein er 0,8 mg / ml. Oppløsningen opprettholdes under avkjøling og omrøring i 72 timer.

Rensing av hybridproteinet utføres ved kromatografi på SP-sepharose FF.

På en kolonne med en diameter på 113 mm, som inneholder 1,5 liter SP-sepharose FF, ekvilibrert med 25 mM Tris-HCI buffer med en pH på 7,5, ble en oppløsning av det renaturerte fusjonsproteinet på pH 7,5 påført. Sorbedprotein elueres fra kolonnen med en saltgradient fra 0 til 0,7 M natriumklorid i den opprinnelige buffer. Fraksjonene som inneholder hybridproteinet kombineres og brukes til å oppnå insulinsubstansen. Utgangen av det renaturerte hybridproteinet med en renhet på 93-96% er 8,1 g.

Innholdet av hybridproteinet bestemmes av den optiske densitet av løsningen ved 280 nm.

En nyopparbeidet oppløsning av 2,025 mg trypsin i saltsyre, tilsatt en oppløsning inneholdende 2,025 mg karboksypteptid B (i et masseforhold på 4000: 1: 1) til 800 ml av den resulterende oppløsningen inneholdende 8,1 g hybridprotein (pH i oppløsningen er 7,5). Etter 2 timer stoppes hydrolysen ved surgjøring av oppløsningen med saltsyre til pH 3,0. Graden av hydrolyse av hybridproteinet er ikke mindre enn 95%. Insulininnholdet i reaksjonsmediet i henhold til RP HPLC-data er 2,1 g.

Natriumklorid tilsettes til den surgjorte oppløsning av hydrolysatet av hybridproteinet til en konsentrasjon på 2M, omrøres i 30 minutter ved 20 ° C og sentrifugeres i 25 minutter ved 25.000 g. Supernatanten kasseres, og utfellingen overføres til det neste rensingstrinn.

Proteinutfellingen, som inneholder 2,1 g insulin, oppløses i 10 mM sitronsyre, natriumklorid tilsettes til en konsentrasjon på 1 M og oppløsningens pH justeres til 6,5. Den opaliserende oppløsningen sentrifugeres og supernatanten påføres på en 5/60 cm kolonne inneholdende 0,8 1 Butyl-Toyopearl 650, tidligere ekvilibrert med 10 mM citratbuffer med 1 M natriumklorid, pH 6,5. Sorbenten vaskes med den opprinnelige bufferoppløsningen til opptakeren når baseline med en elueringshastighet på 25 cm / time, deretter med den samme buffer under betingelser med en lineært redusert konsentrasjon av natriumklorid fra 1 til 0 M og 10 mM citratbuffer, pH 6,5. Det sorberte materiale ble eluert med en lineær gradient av etylalkohol fra 0 til 20% i 10 mM citratbuffer. Fraksjonene av proteinoppløsningen analyseres ved RP-HPLC. Fraksjoner som inneholder insulin med en renhet på minst 98% kombineres og overføres for ytterligere rensing. Utsignalet fra insulin er 0,95 g. Proteinfraksjoner som inneholder insulin med høyere innhold av urenheter, kombineres og sendes for ytterligere rensing.

En oppløsning inneholdende 0,95 g insulin blandes med en lik mengde av en oppløsning av 4 M natriumklorid i 10 mM sitronsyre, holdes under omrøring i kjøleskap i 2 timer og sentrifugert i 20 minutter ved 20000 g. Bunnfallet oppløses i en 1,0 M oppløsning av eddiksyre, filtreres og overføres til gelfiltrering. Gelfiltrering av insulinoppløsningen utføres på en 5/100 cm kolonne som inneholder 1,7 liter Sephadex G-50 SF SG, som tidligere er ekvilibrert med en 1,0 M oppløsning av eddiksyre. Påføringen av insulinoppløsningen og elueringen utføres ved en hastighet på 10 cm / time. De oppnådde fraksjoner analyseres ved hjelp av HPLC-ekskluderingsmetoden, og fraksjonene som inneholder insulin med et minimumsinnhold av urenheter med høy og lav molekylvekt er kombinert. Utgangen av insulin på dette stadiet er 0,8 g

Til 250 ml av en oppløsning av insulin i 0,5 M eddiksyre inneholdende 0,8 g insulin, tilsett zinkacetat til en konsentrasjon på 0,1 M, bring pH til 6,0 med konsentrert ammoniakkløsning. Suspensjonen omrøres på en magnetomrører ved 6 ° C i 2 timer, deretter sentrifugeres ved 20.000 g i 15 minutter. Supernatanten kastes, og utfellingen blir vasket med pyrogenfritt vann og sentrifugert igjen. Insulinsubstituatet oppløses i 60 mM sitronsyre med en konsentrasjon på 3,5 mg / ml. Den resulterende løsningen underkastes steril filtrering, tilsatt etylalkohol til en total konsentrasjon på 14,7% og 3,0 ml av en 5% vandig løsning av sinkklorid, hvoretter pH-verdien er justert til 6,4. Litt oppaliserende oppløsning lar seg sakte blande på en magnetomrører ved 6 oC i 4 timer, deretter sentrifugeres ved 5000 g i 15 minutter. Supernatanten helles, precipitatet vaskes suksessivt med pyrogenfritt vann (to ganger), etylalkohol og absolutt etylalkohol (to ganger). Krystallene tørkes i en vakuumovn.

Utbyttet av krystallinsk insulin er 0,7 g.

En fremgangsmåte for fremstilling av genetisk-modifiserte humant insulin omfatter dyrking av den produserende stammen Escherichia coli JM 109 / pPINS07, ødeleggelse nedbryting av cellene, separering av inklusjonslegemer inneholdende fusjonsproteinet, deres oppløsning i en buffer inneholdende urea og ditiotreitol, restaurering av disulfidbindinger, renaturering og rensing av renatureres hybridprotein, dets spaltning med trypsin og karboksypeptidase B, etterfulgt av rensing og frigjøring av insulin, karakterisert ved at inklusjonslegemene vaskes på forhånd med løsning Protein og reduksjonen av disulfidbindinger utføres samtidig i en bufferløsning, i tillegg inneholdende 5-10 mM ditiotreitol i 3-7 timer, rensingen av det renerte fusjonsproteinet utføres i ett trinn ved anvendelse av ionebytte-sorbenter med DEAE- eller SP-grupper; utført ved felles hydrolyse med trypsin og karboksypteptase B ved et massforhold mellom hybridprotein, trypsin og karboksypteptase B 4000: 1-2: 1, blir rensing av insulin utført ved hydrofob kromatografi ved anvendelse av sorbent B utyl-Toyopearl 650, etterfulgt av gelfiltrering, og isolasjonen ved krystallisering i nærvær av sinksalter.

Insulinoppløselig menneskelig genetikk: produksjonsteknologi

Virkningen av stoffet, kontraindikasjoner

For behandling av diabetes av noe slag, brukes genetisk utviklet insulin på latin - Solubil, som betyr i form av en løsning. Ved type 2 sykdom, brukes den hvis tabletter ikke passer. Når du reduserer nivået av glukose i blodet under det nødvendige.

Egenskaper av stoffet gir muligheten til å bruke den i begynnelsen av diabetisk koma. Humant genetisk utviklet insulin er foreskrevet i barneperioden. Dette er nødvendig hvis spesiell mat ikke hjelper. Dette stoffet brukes når en infeksjon oppstår i pasientens kropp hvis kroppstemperaturen stiger.

Insulin, utviklet på genbasis, brukes ved arbeidstid, under operasjon eller skader av annen art. Legemidlet vil bidra til å sikre overgangen til et langtvirkende hormon. Før du begynner å bruke noe stoff, utføres tolerabilitetstester. Det anbefales ikke å bruke det hos pasienter med hypoglykemi.

Genetisk utviklet insulin interagerer med celler som et resultat av hvilke komplekser dukker opp. Hvis en celle går inn i den, begynner den å fungere bedre på grunn av stimuleringen mottatt. Derfor produseres flere enzymer.

I prosessen er det en rask absorpsjon av glukose, karbohydrater er godt behandlet. Leveren vil produsere glukose lenger, og proteiner absorbere det raskere.

Effekten av stoffet avhenger av stoffet som brukes, dets dose og stedet for innføring i kroppen. Alt dette må gjøres på anbefaling fra en lege. I begynnelsen av bruken av legemidlet bør være under tilsyn av en spesialist, og for eventuelle bivirkninger, konsulter lege.

medisiner

Insulinoppløselig (Solubil) har forskjellige handelsnavn. Insulin er forskjellig når det gjelder eksponering, produksjonsprinsippet. Forberedelser har navn, avhengig av type. Et hormon som er genetisk konstruert for å være i flere medisiner:

Dette er ikke hele listen med narkotika, de er ganske mye. De varierer i sine egenskaper. Hovedforskjellen kriteriet er varigheten av stoffet eksponering. Deres handling kan være begrenset til noen få timer eller en hel dag.

Det er også en slags kombinert medisin, slike legemidler kalles bifasisk. I deres sammensetning er det en komponent som kan endre varigheten av eksponeringen av stoffet. I dette tilfellet vil medisinen referere til typen av blandinger. I denne formen er det forberedelser som er laget på genetisk grunnlag. Insulinpreparater med bifasiske egenskaper:

De brukes to ganger om dagen, før måltider i 30 minutter. Slike tiltak er nødvendige på grunn av at bruken av denne typen insulin er forbundet med måltider.

Når man bruker det genetisk utviklede hormonproduksjonsprinsippet, er det insulin, som er preget av en gjennomsnittlig varighet av virkningen. Oppløselig insulin begynner å virke innen en time, men full effekt vil bli synlig om 6 til 7 timer. Etter 12 timer vises den helt. Denne typen medisiner inkluderer:

Humant insulin produsert i henhold til genteknikkprinsippet kan ha kort varighet. Dette er stoffer:

Den aktive fasen av eksponering vil bli observert i 2 til 3 timer, og de første manifestasjonene vil bli synlige etter 30 minutter. Legemidler i denne gruppen vil bli eliminert fra kroppen om 6 timer.

INSULIN Instruksjoner for bruk

Indikasjoner for bruk

Sammensetning og utgivelsesform

Holdbarhet og lagringsforhold

Insulin er et protein-peptid hormonalt stoff; Insulin brukes som et spesifikt middel for behandling av diabetes.

Insulin påvirker aktivt karbohydratmetabolisme - bidrar til å redusere glukoseinnholdet i blodet og dets absorpsjon av vevet, forenkler penetrasjonen av glukose i cellene, fremmer syntesen av glykogen, forhindrer fett og aminosyrer i å bli karbohydrater.

Indikasjoner for bruk

I små doser (5-10 U) blir insulin brukt til leversykdommer (hepatitt, innledende stadier av cirrhosis), for acidose, utmattelse, tap av ernæring, for furunkulose, for tyrotoksikose.

I nevropsykiatrisk praksis brukes insulin i alkoholisme, med utmattelse av nervesystemet (i doser som forårsaker en hypoglykemisk tilstand).

I psykiatrien, for insulinkomatosebehandling (når du behandler noen form for skizofreni, administreres insulinoppløsning i betydelige mengder, som med en gradvis økning i doser forårsaker hypoglykemisk sjokk).

I dermatologi brukes insulin til diabetisk toksidermi, som ikke-spesifikke midler - for eksem, akne, urtikaria, psoriasis, kronisk pyoderma og gjærhudssår.

Regler for anvendelse

Vanligvis injiseres insulin subkutant eller intramuskulært, intravenøst ​​- bare i spesielt alvorlige tilfeller med diabetisk koma; Suspenserte preparater injiseres kun subkutant.

Injiseringer av en daglig dose gjøres i 2-3 doser en halv time til en time før måltider, effekten av en enkelt dose av legemidlet begynner på 30-60 minutter og varer 4-8 timer.

Ved intravenøs administrasjon av insulin oppnås den maksimale hypoglykemiske effekten på 20-30 minutter, retur av sukkernivået til originalen - om 1-2 timer.

Før du samler insulinpreparater av langvarig virkning i sprøyten, skal innholdet ristes til en jevn suspensjon dannes i hetteglasset.

I diabetes utføres behandlingen under betingelse av samtidig tilslutning til dietten; doseringen er avhengig av alvorlighetsgraden av sykdommen, pasientens tilstand og sukkerinnholdet i urinen (basert på 1 U for hver 5 g sukker utskilt i urinen). Vanligvis varierer insulindoser fra 10-40 u per dag.

I en diabetisk koma kan daglig dose av et legemiddel administrert subkutant økes til 100 IE eller mer, ved intravenøs administrering opptil 50 IE per dag.

I diabetisk toksidermi er insulin foreskrevet i store doser, avhengig av hvor alvorlig den underliggende sykdommen er.

For resten av indikasjonene er små doser insulin vanligvis foreskrevet (6-10 U per dag), ofte (med generell utarmning, leversykdom) i kombinasjon med en glukosebelastning.

Bivirkninger

Med en overdose av insulin og sent inntak av karbohydrater, kan det oppstå hypoglykemisk sjokk - et giftig symptomkompleks som følger med generell svakhet, overdreven svette og salivasjon, svimmelhet, hjertebank, kortpustethet. i alvorlige tilfeller - tap av bevissthet, delirium, kramper, koma.

Behandling av overdose: Når de første tegnene på hypoglykemi oppstår, skal pasienten få 100 g hvitt brød, søt te eller noen få skjeer med granulert sukker. I tilfeller av uttalt hypoglykemisk sjokk er intravenøs administrering av 20-40 ml 40% glukoseoppløsning nødvendig, etterfulgt, om nødvendig ved innføring av 300-500 ml 5% glukoseoppløsning under huden. Også injisert subkutant med 1 ml 0,1% oppløsning av epinefrinhydroklorid.

Kontra

Akutt hepatitt, pankreatitt, nephritis, nyresykdom, magesår og duodenalsår, dekompensert hjertesykdom.

Spesielle instruksjoner

Forsiktighet ved bruk av insulin er nødvendig når det forskrives til pasienter som lider av koronarinsuffisiens og hjernesirkulasjonsforstyrrelser.

Ved bruk av medisiner med langvarig virkning i forbindelse med muligheten for individuelle svingninger i reaksjonen på innføringen av disse midlene, anbefales det å undersøke 3-4 porsjoner urin for sukker, daglig sukkerrør og blodsukker. Dette gjør at du kan angi tidspunktene for insulinadministrasjon, med tanke på tidspunktet for oppstart av maksimal sukkerreduserende effekt.

Langvirkende insulinpreparater er uegnede (på grunn av den langsomme utviklingen av effekten) for behandling av prekomatose- og comatosevilkår hos diabetikere.

Effekten av insulin er forbedret ved samtidig utnevnelse av lipokain.

Sammensetning og utgivelsesform

Insulin Oppskrift

Insulin til injeksjon frigjøres i sterile ampuller med en kapasitet på 5 ml og 10 ml, med en aktivitet på 20 IE, 40 IE eller 80 IE i 1 ml oppløsning.

Insulin for medisinsk bruk er et hvitt, hygroskopisk pulver, oppløselig i vann, oppnådd ved ekstrahering av bukspyttkjertelen av slaktekjøtt (animalsk insulin) eller syntetisk. Inneholder 3,1% svovel.

Insulinløsninger er en klar, fargeløs eller litt gulaktig sur væske (pH 2,0-3,5), som fremstilles ved å fortynne krystallinsk insulin i vann til injeksjon, surgjøres med saltsyre med tilsetning av glyserin og 0,25-0,3% fenoloppløsning eller tricresol for konservering.

Suspensjoner av langvarig virkning produsert i sterile ampuller på 5 ml og 10 ml, hermetisk forseglet med gummipropper med innløpende aluminiumskapsler.

Holdbarhet og lagringsforhold

Oppbevares med forsiktighet (liste B) ved 1-10 ° C, insulinpreparater bør ikke fryses.

Utløpsdatoen for insulin til injeksjon er 2 år.

Insulinpreparater

Swinsulin - en vandig oppløsning av krystallinsk insulin avledet fra bukspyttkjertelen. Legemidlet er brukt hos pasienter med motstand mot stoffet avledet fra bukspyttkjertelen.

Monosuinsulin - et kortvirkende stoff som inneholder krystallinsk svineinsulin, har en rask og relativt kort sukkerreduserende effekt. Det brukes til insulinresistens, lipodystrofi, lokale og generelle allergiske reaksjoner som følge av injeksjoner av andre insulinpreparater. Monosuinsulin administreres subkutant eller intramuskulært 15-20 minutter før måltider fra en til flere ganger om dagen. Handlingen skjer i 15-20 minutter, maksimal effekt oppnås om 2 timer, medikamentets varighet er ikke mer enn 6 timer. Ved allergiske reaksjoner, før monosuinsulin påføres, utføres en intrakutan test (0,02-0,04 U). I lipodystrofi injiseres oppløsningen subkutant ved grensen til den friske og syke delen av subkutan fettvev: hos barn, 2-4 IE, hos voksne 4-8 u, i 30-40 dager. Gjenta om nødvendig behandlingen. I tilfelle av overdose er sult, svakhet, svette, hjertebank, svimmelhet (hypoglykemi) mulig. Det må tas forsiktighet ved koronar insuffisiens, forstyrrelse av hjernecirkulasjon.

En sink-insulinsuspensjon er en suspensjon som består av amorfe og krystallinske sink-insulinsuspensjoner.

Amorphous Zinc Insulin Suspension - Suspensjon i form av amorft pulver i acetatbuffer med en varighet på 10-12 timer og maksimal effekt i løpet av de første 7 timene.

En suspensjon av krystallinsk sinkinsulin er en steril suspensjon av krystallinsk insulin i acetatbuffer, et legemiddel med en varighet på opp til 36 timer, maksimumet opptrer 16-20 timer etter administrering.

Protamin-insulin suspensjon - steril suspensjon av insulin krystaller i kombinasjon med protamin i fosfat buffer.

Triprotamin-sink-insulin - 10 ml flasker, preparat av sammensetningen: insulin - 40 U, ​​sinkklorid - 0,08 mg, tryprotamin - 0,8 ml, glukose - 40 mg, disubstituert natriumfosfat - ca. 4 mg, tricresol - 3 mg.

Globin-sink-insulin er et langtvirkende stoff, virkningsvarigheten tar det midterste mellom et vanlig stoff og tryprotamin-sink-insulin.

Protamin-sink-insulin - en tynn suspensjon av hvitt. En funksjon av suspensjonen, sammenlignet med det vanlige medikamentet, er en langsommere virkningstakt og en lengre varighet av den.

Suspensjon av protaminsinkinsulin - Steril suspensjon av krystallinsk insulin, protamin, sinkklorid og natriumfosfat, et legemiddel av langvarig virkning.

Insulin B - langtidsvirkende insulin med tilsetning av aminoquincarbamidhydroklorid.

Insulin-lang suspensjon - amorft svinekulinsulin blandet med sink og krystallinsk insulin av storfe i et kompleks med sink (i forholdet 3: 7). Legemidlet er en forlenget handling, injiseres subkutant og intramuskulært med moderat og alvorlig diabetes mellitus. Sukkerreduserende effekt oppstår etter 2-4 timer, oppnår maksimal aktivitet etter 8-10 timer og varer 20-24 timer. Doser og antall injeksjoner per dag settes individuelt, med tanke på mengden sukker som utskilles i urinen på forskjellige tider av dagen, sukkerinnholdet i blodet. Legemidlet er ikke brukt i diabetisk koma og prekomatoznom tilstand. Ved overdosering kan en hypoglykemisk tilstand og allergiske reaksjoner utvikle seg (urticaria, utslett, kløe, angioødem).

Insulin Semilong Suspension - inneholder amorft svin insulin i kombinasjon med sink. Legemiddel av langvarig virkning. Brukt med diabetes mellitus av moderat alvorlighetsgrad og alvorlig form, med daggryglykemi og glykosuri, injisert subkutant eller intramuskulært. Effekten er notert på 1-1,5 timer, maksimal aktivitet - i 5-8 timer. Virkningsvarighet for stoffet - 10-12 timer.

Insulin ultralong suspensjon - inneholder oksekrystallinsk insulin i kombinasjon med sink. Brukes subkutant og intramuskulært med diabetes mellitus av moderat alvorlighetsgrad og alvorlig form, i andre halvdel av natten og tidlig om morgenen. Sukkerreduserende effekt er notert på 6-8 timer. Virkningsvarighet er 30-36 timer.

egenskaper

Insulin (Insulinum) - et høymolekylært protein, et hormon som produseres av bukspyttkjertelen hos pattedyr, utskilles av basofile insulocytter (p-celler i bukspyttkjertene i Langerhans).

Frederick Banting, Charles Best og James Collip oppnådde først insulin fra bukspyttkjertelen av dyr i 1921.

Insulin er en spesifikk regulator for karbohydratmetabolismen ved å aktivere heksokinase som fremmer glukoseutnyttelse - dens penetrasjon i vev (hovedsakelig muskler) og brennende, og stimulerer også syntesen av glykogen fra glukose i muskelvev og i leveren, hemmer glukoneogenese.

Per virkemåte (ED) tar en spesifikk sukkerreduserende aktivitet på 0,045 mg krystallinsk insulin (40 ml ED er inneholdt i 1 ml insulinoppløsning).

Den terapeutiske effekten og behovet for insulin i diabetes mellitus er forbundet med eliminering av lidelser som oppstår fra denne sykdommen i interstitial metabolisme av karbohydrater og fettstoffer. Dette manifesterer seg i å forbedre pasientens generelle tilstand, redusere blodsukkernivåene, redusere eller eliminere glukosuri og acetonuri, samt lindre en rekke kroppssykdommer som følger med diabetes mellitus (furunkulose, polyneuritt, polyartrit, etc.).

Insulin er lett adsorbert av kaolin, aktivert karbon og andre adsorbenter, lettoppløselige i vann, alkalier, syrer og svake alkoholløsninger; uoppløselig i 96% alkohol, aceton og eter.

Hormonet er inaktivert ved bruk av sollys (UV-stråling), reduksjonsmidler og oksidasjonsmidler, det er lett ødelagt av proteolytiske enzymer (spesielt trypsin). Termisk stabilitet av insulin avhenger av mediumets pH - i løsninger av en sur reaksjon, insulin tåler koking i en time, stabiliteten i alkaliske løsninger er mye lavere.

Insulinproduksjon

Den mest brukte metoden for å skaffe animalsk insulin fra bukspyttkjertelen av svin og storfe er følgende (forskjellige produsenter har mange modifikasjoner på hovedprosessene):

  1. Primær utvinning av finfordelt bukspyttkjertel med sure alkohol.
  2. Fordampning av alkoholholdig ekstrakt under vakuum, avfetting og gjenoppløsning i 80% alkohol, hvorfra rå insulin utsettes med absolutt alkohol eller eter.
  3. Oppløsning av rå insulin i destillert vann og dets etterfølgende rensing ved en av følgende metoder: ved utfelling fra en vandig løsning med salter; utfelling av pikrinsyre med insulinpikrat; avsetning av insulin i det isoelektriske punkt av løsningen med pH = 5,0; adsorpsjon på kaolin eller aktivert karbon.

Både insulinsalter (oftest klorid) og insulinbase kan oppnås.

Indikasjoner for bruk

Genetisk utviklet insulin er utviklet for insulinbehandling for:

  • SD I, II-arter: når det er umulig å kontrollere orale hypoglykemiske medisiner eller deres ineffektivitet
  • Diabetisk ketoacidose
  • koma
  • Diabetes under graviditet (hvis kostholdsterapi ikke hjelper)
  • For intermitterende bruk hos diabetikere mot bakgrunnen av smittsomme patologier med samtidig feber, i forberedelse til kirurgi, traumer, arbeid, forstyrrelser i metabolske prosesser, samt under overgangen til langvarige insuliner.

Sammensetningen av stoffet

Stoffet humaninsulin er en del av preparater fra forskjellige produsenter, derfor er hjelpekomponenter forskjellig fra hverandre.

Pris: 10 amp. 1 ml - fra 177 rubler., Blekkpatroner 5 stk. på 3 ml -

1 ml injeksjonsvæske, oppløsning inneholder:

  • Aktivt stoff: 100 IE
  • Ytterligere komponenter: sinkklorid, glyserol, natriumhydroksyd (eller saltsyre), vann.

Legemiddel i form av en klar, umalet væske til parenteral bruk. Det er pakket i ampuller, penn-sprøyter, hetteglass.

Medisinske egenskaper

Stoff av kort virkning for bruk i insulinavhengig diabetes mellitus type 1 eller 2. Etter penetrasjon reagerer den med spesifikke reseptorer av cellemembranen, noe som resulterer i dannelsen av et insulin-reseptorkompleks, som igjen aktiverer syntesen av cAMP, strømmen av interne prosesser i cellen, inkludert syntesen av de viktigste enzymene.

Reduksjonen i glykemienivået skyldes økningen i transporten, mer aktiv utnyttelse, akselerasjon av proteinsyntese og nedbremsing av glukoseproduksjonen ved leveren.

Utviklingen av hypoglykemisk virkning etter injeksjonen vises etter 15-30 minutter, når toppverdiene i 1-3 timer og varer, avhengig av størrelsen på den administrerte dosen. Varigheten av genetisk ingeniørstoff er i stor grad bestemt av dosering, lokalisering og type administrasjon, pasientens egenskaper.

Stoffet sprer seg ujevnt i vev, passerer ikke gjennom morkaken og melken. Disintegrerer hovedsakelig i leveren, nyre under påvirkning av insulinase. Fra kroppen utskilles urinen.

Metode for bruk

Injiseringer av menneskelig genetisk utviklet insulin injiseres under huden eller inn i lumen i venene. Doseringen velges individuelt i henhold til det glykemiske nivået. Det gjennomsnittlige daglige behovet for stoffet - 0,3-1 IE. Hos pasienter med insulinresistens kan det være høyere, og hos personer med resterende sekresjon av stoffet - lavere.

En injeksjon gjøres en halv time før du spiser eller mottar karbohydratprodukter. For subkutane injeksjoner, velg et sted på den fremre veggen i magen, så vel som i overlåret, baken, eller i overfladisk skuldermuskulatur. For nødstilfeller, når det er viktig å raskt endre nivået av glykemi, er det bedre å stikke inn i magen, siden insulin i dette tilfellet absorberer raskere.

Hvis stoffet injiseres i huden, så er risikoen for å komme inn i muskelen minimal. For å forhindre utløp av medisinering, anbefales det ikke å trekke ut nålen i 6-10 sekunder. For injeksjon må et nytt område brukes hver gang for å unngå strukturell skade på dermis og subkutant vev.

Innsetting i venen krever spesiell kunnskap og lang erfaring, derfor er slike prosedyrer kun tillatt for kvalifiserte medisinske spesialister.

Spesielle notater

Før måling av dosering av genmodifisert insulin fra et hetteglass eller en ampulle, kontroller at injeksjonsoppløsningen er klar. Hvis det er noen inneslutninger i det, viser suspensjonen eller beholderen med medisinen seg å være riper, revnet eller dented, da antas medisinen uegnet til administrasjon. Det bør kastes i henhold til aksepterte regler.

Før injeksjonen er det nødvendig å varme medisinen på en naturlig måte, slik at temperaturen tilsvarer romtemperaturen.

Doseringen vil kreve endringer hvis pasienten har en smittsom sykdom eller skjoldbruskdysfunksjon. Tilpasning er nødvendig i tilfelle av Addisons sykdom, eldre, hypofyse insuffisiens, kronisk nyresvikt.

Bør ikke tillate utvikling av hypoglykemi. Dets utvikling innledes ved innføring av en stor mengde av insulin er utilstrekkelig, uriktig erstatning medikament hoppe måltider, oppkast, diaré, fysisk overbelastning kjører patologi av lever og / eller nyre, adrenal dysfunksjon, kombinasjon med andre legemidler. I tillegg kan nivået av glykemi reduseres etter endring av injeksjonssonen, som overføres fra animalsk insulin. I sistnevnte tilfelle skal overgangen til det menneskelige stoffet gjøres ved medisinsk avtale. Uavhengig erstatte stoffet er forbudt.

Diabetikere bør være forsiktige når man håndterer transport, komplekse mekanismer og risikofylte aktiviteter, hvis de har en predisponering mot hypoglykemi. For at de skal kunne raskt gjenopprette glukosenivåene, må de hele tiden holde sukker og karbohydrater med dem.

Det er nødvendig å informere legen din om tilfeller av hypoglykemi, siden det er viktig for riktig bestemmelse av dosen.

Gravide kvinner må huske at i de tidlige stadiene øker behovet for insulin, og fra andre trimester øker det.

Diabetikere, daglig bruk av mer enn 100 IE per dag, når de bytter til et annet legemiddel, skal innlegges.

Under graviditet og amming

Legemidlet kan brukes av gravide kvinner, siden insulin ikke overvinter placentabarrieren. Videre kan mangelen på tilstrekkelig behandling av diabetes negativt påvirke tilstanden til ikke bare moren, men også hennes barn. Gravide kvinner med diabetes bør være under nøye medisinsk tilsyn og økt glykemisk kontroll. Ved beregning av doseringen er det nødvendig å ta hensyn til at i begynnelsen av svangerskapet er behovet for insulin i kroppen redusert, og fra og med andre trimester øker det. Etter fødselen, returnerer nivået av glykemi vanligvis til det det var før unnfangelsen.

Sykepleiere kan bruke stoffet, da det ikke er farlig for barnet. Det kan imidlertid kreve hyppigere test av doser og effektiviteten av diettbehandling.

Kontraindikasjoner og forholdsregler

Bruk hos pasienter med diabetes er forbudt når:

  • Individuell intoleranse eller overfølsomhet overfor bestanddelene
  • Lav glykemi.

Cross-drug interaksjoner

Diabetikere må vurdere at løselig insulin kan kombineres dårlig med andre medisiner:

  • Det er kontraindisert å kombinere insulin bifasisk menneske som er genetisk konstruert med noen medisinske løsninger.
  • Saharoponizhayuschee of Medicine synker under påvirkning av SCS, glukagon PM med veksthormoner, oral prevensjon, tiazider og sløyfediuretika, østrogen, kalsiumantagonister, heparin, hormoner, skjoldbruskkjertel sulfinapirazona, TCA, danazol, nikotin, diazoksid, klonidin, morfin, narkotiske stoffer, fenytoin, antihistamin medisiner, sympatomimetiske legemidler.
  • Virkningene av insulin bifasisk menneskelig genetisk konstruert er forbedret når kombinert med iMAO-legemidler, sulfinylamider, orale sukkerreduserende legemidler, ACE-blokkere, karbonatdehydratase, NPVS, ASK, androgener, anabolske steroider, bromokryptin, tetracyklin, krabber, krabber, acetabolitter, acetabularer, androgener, anabole steroider kinidin, kinin, etylalkohol.
  • BAB, octreotid, pentamidin, reserpin kan uforutsigbart endre effekten av insulin (styrke eller svekke effekten).

Bivirkninger

Insulinoppløselig er i stand til å provosere en negativ respons på kroppens indre systemer:

  • Manifestasjoner av allergier: angioødem, urticaria, apné, feber, trykkfall
  • Reduksjon av blodsukker: sterk svetting, blekhet av dermis, svette, skjelving av lemmer og / eller torso, hjertebank, sterk appetitt, økt angst, nummenhet, perioral området, alvorlig slapphet / søvnløshet, smerter, hode, nedstemthet, depresjon, irritabilitet, svimlende gangart, atferdsendringer, synshemming, taleforstyrrelser, hypoglykemisk koma, lidelser i bevissthet (fra milde forringelser til pre- eller comatosestatus).
  • Ketoacidose, en kraftig økning i blodglukose (hyperglykemi mulig ikke-samsvar med settet diett, hopper injeksjon, smittsomme sykdommer, febrile tilstander, inn altfor liten mengde bifasisk humant insulin rDNA). Patologi manifesteres av tørst, hevelse i ansiktet, døsighet, forverring av appetitten.
  • Reversibel synshemming (hovedsakelig under overgangen til oppløselig insulin eller i begynnelsen av kurset).
  • Dermis og n / a fiber: kløe, hevelse av vev, fettdegenerasjon i injeksjonsområdet (atrofi eller hypertrofi).
  • En økning i innholdet av antiinsulinantistoffer og følgelig utviklingen av hyperglykemi.
  • Gensidige reaksjoner av genetekniske stoffer med endogent insulin.
  • Ved begynnelsen av kurset: forbigående brekning, ødem (forsvinner spontant etter hvert som behandlingen utvikler seg).

overdose

Intensiteten av manifestasjonene av overdose og bivirkninger avhenger av den anvendte doseringen. Humant insulin, gitt i for store mengder, forårsaker følgende fenomener:

  • Den kraftige nedgangen i glukosenivåer (hypoglykemi), som manifesterer seg kaldsvette, alvorlig svakhet, hud blekhet, tremor, hjertebank, økt nervøsitet, nummenhet i fot, sult, smerte hode.
  • Kramper, koma.

Hvis patologien manifesteres i mild og moderat form, er pasienten bevisst, da kan han øke nivået av glykemi selv ved å ta karbohydratmatvarer ved å suge det raffinerte sukker. I tilfeller der pasienten er i en svømmetur, vil det være behov for utvendig hjelp (rundt folk, ambulanse). For å eliminere patologien er det nødvendig å lage en glukagoninjeksjon (inn / inn, in / m, s / c) eller injisere i / i deksroseoppløsning. I en comatose tilstand injiseres stoffene i en stråle til offeret våkner og tilstanden vender tilbake til normal.